自行车在马路上通行规定如下：
1、自行车实行右侧通行；
2、道路划分有机动车道、非机动车道和人行道的，机动车、非机动车、行人实行分道通行；
3、有自行车道的，应当在自行车道内行驶；
4、没有自行车道的，应当靠行车道的右侧行驶；
5、有自行车道但被占用无法通行的，可借用相邻的机动车道通行，并在驶过被占用路段后迅速驶回自行车道；
6、自行车不得进入高速公路行驶。
驾驶自行车横过机动车道要注意以下几点：
1、在路段上横过机动车道，应当下车推行，有人行横道或者行人过街设施的，应当从人行横道或者行人过街设施通过；
2、在没有人行横道、没有行人过街设施或者不便使用行人过街设施的，在确认安全后直行通过。
【法律依据】：
《中华人民共和国道路交通安全法》第五十七条
驾驶非机动车在道路上行驶应当遵守有关交通安全的规定。非机动车应当在非机动车道内行驶；在没有非机动车道的道路上，应当靠车行道的右侧行驶。
第五十
残疾人机动轮椅车、电动自行车在非机动车道内行驶时，最高时速不得超过十五公里。
《中华人民共和国道路交通安全法实施条例》第七十条
驾驶自行车、电动自行车、三轮车在路段上横过机动车道，应当下车推行，有人行横道或者行人过街设施的，应当从人行横道或者行人过街设施通过；没有人行横道、没有行人过街设施或者不便使用行人过街设施的，在确认安全后直行通过。
因非机动车道被占用无法在本车道内行驶的非机动车，可以在受阻的路段借用相邻的机动车道行驶，并在驶过被占用路段后迅速驶回非机动车道。机动车遇此情况应当减速让行。